Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型号糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次消失家兔自身血清到消失1改进型肝炎临床病征的实质性率在学童时期就有良好的详细描述，多个家兔自身血清白血病的学童中会有70%在血清转成后10年内患上肝炎，而随访15年的学童这一%增高到84%。比起于之下，占到临床1改进型肝炎一半以上的改进型1改进型肝炎的确诊有助于还没有取得充份的科学研究。

更多的人开始采用再行控制系统来定义1改进型肝炎的实质性：有机体在消失多种家兔自身血清时进到第1阶段性，消失血糖间歇性时进到第2阶段性，消失病征时进到第3阶段性。一些多发家兔自身血清白血病的有机体，在1期和2期，实质性较比较慢，并拓展为确诊的1改进型肝炎。我们之前详细描述了一各别在首次侦测到多种家兔自身血清比对后非常寡10年无肝炎的极比较慢实质性者，这各别病症总人数寡，但相似性非常确实。随后，我们发现家兔自身抗原酪氨酸CD8+T蛋白反不宜在实质性较比较慢的病症中会基本不近十年存在，但在近期确诊和近十年近十年存在的肝炎病症中会很易于侦测到。这可能指出，与实质性病症比起于，这些病症自身免疫反不宜的适度减弱。

早期科学研究指出，尽管适度性T蛋白(Treg)存量正常人，但肝炎病症近十年存在一些基本功能缺陷，其中会包括对IL-2的反不宜并能降低。此外，肝炎病症中会的效不宜CD4+T蛋白可能对适度更具抵抗性，发挥为效不宜T蛋白的抑制作用减弱，自然产生的Treg和体外产生的其会Treg，以及抗原历程的CD4+T蛋白中会IL-2反不宜减弱。本科学研究的目的是详细描述了CD4+适度性T蛋白(Treg)在一小群极较比较慢实质性者中会的相似性，他们的平均年长为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

方法：BOX科学研究是一项以人群控制系统化的纵向科学研究，在21岁以下出院的病症亲属中会检查1改进型肝炎的危险因素。我们之前详细描述了近十年较比较慢实质性者的相似性，他们保持多重家兔自身血清白血病超过10年，但没有消失肝炎的临床病征，比较慢性或非开展性自身免疫。随后，10名之前保持无肝炎并不想提供大量血液比对的较比较慢实质性者纳入T和B蛋白基本功能科学研究。在目前的科学研究中会，8名比较慢实质性者(SP各别)，中会位年长43岁(31-72岁)，18 - 32岁之间的家兔自身血清白血病。所有的旁观者都处于1改进型肝炎实质性的1期，尽管一些人随后失去了家兔自身血清对某些抗原的黄疸，然而，一名病症之前处于2期非常寡6年，但没有消失临床病征，一名病症被诊断为肝炎，该受试者72岁，在采集科学实验比对时，其HbA1c升高到53 mmol/mol(7%)，在的测试中会对该NAD开展了实际上评估。分离外周血单个核蛋白(PBMCs)，采用多数值流式蛋白心法和T蛋白抑制作用试验评估NAD中会Treg的频带、表改进型和基本功能。采用FlowSOM和CITRUS(聚类比对、连续性和转回)开展无监督聚类科学研究，评估Treg表改进型。

结果：与身心健康NAD比起于，来自比较慢实质性体的梦境CD4+T蛋白的监督聚类推测，抑制的梦境CD4+ Treg频带增高，与糖皮质激素其会的TNFR就其蛋白(GITR)传达增高有关。一名HbA1c升高的病症与实质性较比较慢者和匹配的相符合各别比起于，Treg序有所有所不同。基本功能科学研究指出，与身心健康NAD比起于，来自较比较慢实质性体的Treg介导的CD4+效不宜T蛋白抑制作用明显受损。发挥为对效不宜CD4+T蛋白CD25和CD134传达的抑制作用增高。

所示1 深入的表改进型科学研究推测，CD4+Treg亚改进型在比较慢实质性路由表中会增高。由FlowSOM转成成的Treg室，聚集在来自所有NAD的活CD4+CD45RA -蛋白上。根据标明物传达比对出10个元簇:梦境T蛋白_1;梦境T cell_2;梦境T cell_3;梦境T cell_4;CD49b梦境T蛋白;HLA-DR + GITR +梦境T蛋白;闪存Treg_1;闪存Treg_2;闪存Treg_3;和闪存Treg_4。(a)采用9个有所不同Treg标明转成成的10个元簇的MST。每个键值代表一个一个大(100个一个大)，更大的元一个大(10个元一个大)在键值各别周围装裱。每个键值中会的饼所示对此单个标明的传达高至。(b)每个元聚类的热所示，以推测整体标明传达。(c, d)为HD各别(c)和SP各别(d)转成成所示，以及FlowSOM辨认的每个元簇的基岩。(e-l)比起轻元素为每个metacluster盒直通所示(轻元素> 0.05%)确定为HD和SP各别:闪存Treg_2 (e),闪存Treg_3 (f),闪存Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +梦境T蛋白(h)、梦境T cell_1(i),梦境T cell_2 (j),梦境T cell_3 (k) n d CD49b梦境T蛋白(l)。浅紫色圆圈代表人口为120人SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon匹配符号秩检查。此键适用于所示形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

所示2 采用CITRUS的预测模改进型断定，Treg频带的增高是实质性较比较慢的图标。AO介导(a - f)和柑桔科学研究(g-k)比较SP旁观者和匹配的HD旁观者在CD4+CD45RA−T蛋白上的差异。(a)互补CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群体的代表性所示。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR传达开展分离，各种类型FlowSOM群体。(b) HD(白斑)和SP(星点)各别以及NADSP 606(浅紫色)中会CD25+ cd127的频带简介所示。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+介导同构的盒直通所示;(c) HLA-DRloGITR−(闪存Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(闪存Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(闪存Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+闪存T cell)。(g - i)柑桔簇双螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3传达强度着色，交叉突出的簇被辨认为SP和HD路由表之间的有所不同。(j)盒直通所示推测了在SP(星点)和HD(灰点)各别中会，CITRUS梦境Treg_3和Treg_4的比起轻元素(%)。(k)直方所示推测每个簇的表改进型(黄色)和Treg标明比起传达与背景传达(紫色);上列，闪存Treg_3;一个大一行，闪存Treg_4。背景与所有其他簇中会标明的传达有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon匹配符号秩检查

所示3 与身心健康献血者比起于，实质性较比较慢者梦境treg的GITR增高。每个梦境CD4+T蛋白元簇(梦境T蛋白_1;梦境T cell_2;梦境T cell_3;CD49b +梦境T蛋白;HLA-DR + GITR +梦境T蛋白;闪存Treg_2;闪存Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)侦测每个传达标明的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)路由表的传达热所示(sp606不包括在内)。(c,d)梦境Treg_4元簇中会所有HD(灰色)、所有SP(紫色)和SP 606(浅紫色)的FlowSOM GITR传达串联，推测直方所示(c)和简介所示(d)。Wilcoxon匹配符号秩和检查，p< 0.07(浅紫色)所有NAD包括，p< 0.05(紫色)NADSP 606和匹配的HD不包括在测试中会。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中会GITR传达，从AO介导，从所有HD(灰色)、所有SP(紫色)和SP 606(浅紫色)串联，推测直方所示(e)和简介所示(f) *p< 0.05, Wilcoxon匹配符号秩检查

所示4 来自较比较慢实质性的CD4+ treg蛋白控制效不宜CD4+T蛋白的并能降低。SP各别用紫色的直通和圆圈对此，HD各别用紫色的直通和圆圈对此，浅紫色的直通/圆圈对此NADsp606。采用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T蛋白开展分选。CD4+CD25−(此番者)被标明为CFSE, Treg按观察的%硫酸铜。用抗CD3 /28微珠抑制蛋白，人才培养3天后开展流式蛋白心法侦测。(a-d)与CD4+此番者比起不宜的treg人才培养(自体)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD此番者人才培养。(a,b,f) CFSE裂解(a,e)和CFSE抑制作用百份(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的抑制作用百份。采用白血病相符合(抑制的响不宜蛋白不含treg)计算抑制作用百份。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差科学研究。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

所示5 效不宜CD4+T蛋白对较比较慢实质性的T蛋白抑制的抑制作用更敏感性。SP各别用紫色的直通和圆圈对此，HD各别用紫色的直通和圆圈对此，浅紫色的直通/圆圈对此NADsp606。采用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T蛋白开展分选。CD4+CD25−(此番者)被cfsel标明，treg按观察的%硫酸铜。用抗CD3 /28微珠抑制蛋白，人才培养3天后开展流式蛋白心法(CD25反染)和蛋白因子科学研究。HD Treg与HD、SP或sp606此番者共同人才培养。(a,b) CFSE裂解(a)和CFSE抑制作用%-(b)。(c,d) CD25抑制作用%-(c)和CD134抑制作用%-(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共人才培养中会的传达。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差科学研究。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

结论：我们得出的结论是，来自较比较慢实质性子的抑制梦境CD4+Treg在GITR传达中会取得了扩展和丰富，强调了进一步科学研究Treg在1改进型肝炎几率有机体中会的异质性的必要性。

原意中有：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28