Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的反复中逐渐扩展

从第一次浮现胰脏自身特异性到浮现1型式乳癌病理征状的方面率在幼儿时期就有很好的描述，多个胰脏自身特异性乙型式肝炎的幼儿中会有70%在血清转换后10年内患上乳癌，而随访15年的幼儿这一%缩减到84%。相比之下之下，占病理1型式乳癌一半以上的型式1型式乳癌的复发的系统还没有人得到充分的分析。

越来越多的人开始采用应于系统来界定1型式乳癌的方面：有机躯在浮现多种胰脏自身特异性时带入第1过渡阶段，浮现胰岛素异常时带入第2过渡阶段，浮现征状时带入第3过渡阶段。一些多发胰脏自身特异性乙型式肝炎的有机躯，在1期和2期，方面较更慢，并拓展为复发的1型式乳癌。我们在此之后描述了一分组在首次验证到多种胰脏自身特异性验证后更加却是少10年无乳癌的却是快方面者，这分组病患者人数却是少，但构造更加明确。随后，我们发现胰脏自身复合物特异性CD8+T受体质反不应在方面加速的病患者中会也就是说不长期存在，但在近期复发和长时间长期存在的乳癌病患者中会很容易验证到。这有可能确实，与方面病患者相比之下，这些病患者血栓反不应的缓冲增强。

早期新发现，尽管缓冲性T受体质(Treg)数量正常，但乳癌病患者长期存在一些功能毛病，其中会包含对IL-2的反不应战斗能力下降。此外，乳癌病患者中会的效不应CD4+T受体质有可能对缓冲更加具抵抗性，观感为效不应T受体质的可抑制逼近，自然地激发的Treg和躯外激发的诱发Treg，以及复合物漫长的CD4+T受体质中会IL-2反不应逼近。本分析的目地是描述了CD4+缓冲性T受体质(Treg)在一小群却是加速方面者中会的构造，他们的平均年纪为43岁(31-72岁)，随访间隔时间为18-32年。

方法：BOX分析是一项以年轻人为基础的纵向分析，在21岁表列确诊的病患者亲属中会健康检查1型式乳癌的生命危险考量。我们在此之后描述了长时间加速方面者的构造，他们保持良好多重胰脏自身特异性乙型式肝炎最少10年，但没有人浮现乳癌的病理征状，更慢性或非同步进行性血栓。随后，10名继续保持良好无乳癌并愿意提供者大量躯液验证的加速方面者纳入T和B受体质功能统计分析。在迄今的分析中会，8名更慢方面者(SP分组)，中会位年纪43岁(31-72岁)，18 - 32岁相互间的胰脏自身特异性乙型式肝炎。所有的旁观者都受制于1型式乳癌方面的1期，尽管一些人随后保住了胰脏自身特异性对某些复合物的橘红色，然而，一名病患者已经受制于2期更加却是少6年，但没有人浮现病理征状，一名病患者被诊断为乳癌，该受试者72岁，在搜集实验者验证时，其HbA1c增高到53 mmol/mol(7%)，在数据统计分析中会对该酪氨酸同步进行了单独审核。转化外周血单个核受体质(PBMCs)，采用多模板流式受体质妖术和T受体质可抑制试验审核酪氨酸中会Treg的阈值、性状和功能。采用FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、比如说和回归)同步进行无委派聚类统计分析，审核Treg性状。

结果：与有益酪氨酸相比之下，来自更慢方面躯的心灵CD4+T受体质的委派聚类推断，激光阴的心灵CD4+ Treg阈值缩减，与抑制作用诱发的TNFR系统性受体(GITR)传达缩减有关。一名HbA1c增高的病患者与方面加速者和转换的大鼠相比之下，Treg谱大致相同。功能统计新发现，与有益酪氨酸相比之下，来自加速方面躯的Treg介导的CD4+效不应T受体质可抑制明显受损。观感为对效不应CD4+T受体质CD25和CD134传达的可抑制缩减。

上图1 险恶的性状统计分析推断，CD4+Treg病毒性在更慢方面路由表中会缩减。由FlowSOM转化成的Treg室，聚集在来自所有酪氨酸的光阴CD4+CD45RA -受体质上。根据标上物传达鉴定出10个元簇:心灵T受体质_1;心灵T cell_2;心灵T cell_3;心灵T cell_4;CD49b心灵T受体质;HLA-DR + GITR +心灵T受体质;磁盘Treg_1;磁盘Treg_2;磁盘Treg_3;和磁盘Treg_4。(a)采用9个完全相同Treg标上转化成的10个元簇的MST。每个终端代表人一个战略性(100个战略性)，较小的元战略性(10个元战略性)在终端分组区域内上色。每个终端中会的饼上图坚称单个标上的传达层级。(b)每个元聚类的热上图，以推断全面性标上传达。(c, d)为HD分组(c)和SP分组(d)转化成上图，以及FlowSOM定位的每个元簇的覆盖层。(e-l)相对于原子量为每个metacluster箱终点站上图(原子量> 0.05%)考虑到为HD和SP分组:磁盘Treg_2 (e),磁盘Treg_3 (f),磁盘Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +心灵T受体质(h)、心灵T cell_1(i),心灵T cell_2 (j),心灵T cell_3 (k) n d CD49b心灵T受体质(l)。粉红色橘色代表人**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对小写字母秩验证。此键适用于上图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

上图2 采用CITRUS的实测声称，Treg阈值的缩减是方面加速的标志。分级去却是化(a - f)和柑桔统计分析(g-k)比较SP旁观者和转换的HD旁观者在CD4+CD45RA−T受体质上的差异。(a)特异性CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l族群的代表人性上图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR传达同步进行转化，模拟器FlowSOM族群。(b) HD(小点)和SP(杂色)分组以及酪氨酸SP 606(粉红色)中会CD25+ cd127的阈值汇总上图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+去却是化子集的箱终点站上图;(c) HLA-DRloGITR−(磁盘Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(磁盘Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(磁盘Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+磁盘T cell)。(g - i)柑桔簇螺旋状由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3传达低压着色，箭头显眼的簇被定位为SP和HD路由表相互间的完全相同。(j)箱终点站上图推断了在SP(杂色)和HD(灰点)分组中会，CITRUS心灵Treg_3和Treg_4的相对于原子量(%)。(k)上图表推断每个簇的性状(白色)和Treg标上相对于传达与背景传达(红色);上列，磁盘Treg_3;下面几几天后，磁盘Treg_4。背景与所有其他簇中会标上的传达有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对小写字母秩验证

上图3 与有益献血者相比之下，方面加速者心灵treg的GITR缩减。每个心灵CD4+T受体质元簇(心灵T受体质_1;心灵T cell_2;心灵T cell_3;CD49b +心灵T受体质;HLA-DR + GITR +心灵T受体质;磁盘Treg_2;磁盘Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)验证每个传达标上的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)路由表的传达热上图(sp606不包含在内)。(c,d)心灵Treg_4元簇中会所有HD(灰色)、所有SP(红色)和SP 606(粉红色)的FlowSOM GITR传达串联，推断上图表(c)和汇总上图(d)。Wilcoxon配对小写字母秩和验证，p< 0.07(粉红色)所有酪氨酸包含，p< 0.05(红色)酪氨酸SP 606和转换的HD不包含在测试中会。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中会GITR传达，从分级去却是化，从所有HD(灰色)、所有SP(红色)和SP 606(粉红色)串联，推断上图表(e)和汇总上图(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对小写字母秩验证

上图4 来自加速方面的CD4+ treg受体质高度集中效不应CD4+T受体质的战斗能力下降。SP分组用红色的终点站和橘色坚称，HD分组用黑色的终点站和橘色坚称，粉红色的终点站/橘色坚称酪氨酸sp606。采用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T受体质同步进行分选。CD4+CD25−(此番者)被标上为CFSE, Treg按观察的%溶液。用抗CD3 /28微珠光阴化受体质，养成3几天后同步进行流式受体质妖术验证。(a-d)与CD4+此番者相对于不应的treg养成(其会)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD此番者养成。(a,b,f) CFSE抑制(a,e)和CFSE可抑制%(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的可抑制%。采用乙型式肝炎对照(激光阴的分组织起来受体质都有treg)计算可抑制%。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差统计分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

上图5 效不应CD4+T受体质对加速方面的T受体质光阴化的可抑制更加引人注意。SP分组用红色的终点站和橘色坚称，HD分组用黑色的终点站和橘色坚称，粉红色的终点站/橘色坚称酪氨酸sp606。采用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T受体质同步进行分选。CD4+CD25−(此番者)被cfsel标上，treg按观察的%溶液。用抗CD3 /28微珠光阴化受体质，养成3几天后同步进行流式受体质妖术(CD25反染)和受体质因子统计分析。HD Treg与HD、SP或sp606此番者共同养成。(a,b) CFSE抑制(a)和CFSE可抑制百分率(b)。(c,d) CD25可抑制百分率(c)和CD134可抑制百分率(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在养成出来中会的传达。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差统计分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

得出结论：我们得出的得出结论是，来自加速方面子的光阴化心灵CD4+Treg在GITR传达中会得到了扩展和丰富，忽略了有利于分析Treg在1型式乳癌风险有机躯中会的一般而言的更加进一步。

原文出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28