Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程当中逐渐扩展

从第一次显现肾脏自身血清到显现1型式白血病外科病因的困难重重率在老年人初就有很好的阐述，多个肾脏自身血清乙型肝炎的老年人里面有70%在血清变换后10年中患上白血病，而随访15年的老年人这一数目增大到84%。相比较之下，九成外科1型式白血病一半以上的型式1型式白血病的发病前提还没有获得充分的研究者。

越来越多的人开始应用于应于系统来定义1型式白血病的困难重重：变异在显现多种肾脏自身血清时带入第1下一阶段，显现血糖持续性时带入第2下一阶段，显现病因时带入第3下一阶段。一些多发肾脏自身血清乙型肝炎的变异，在1期和2期，困难重重较太快，并其发展为发病的1型式白血病。我们之前阐述了一两组在首次侦测到多种肾脏自身血清取样后至再加10年无白血病的亦非太快困难重重者，这两组病患人数再加，但特征非常明确。随后，我们断定肾脏自身复合物依赖性CD8+T细胞会催化在困难重重缓太快的病患里面基本不不存在，但在近期发病和长期不存在的白血病病患里面很容易侦测到。这不太可能说明了，与困难重重病患相比较，这些病患自身免疫催化的平衡弱化。

最初研究者说明了，尽管平衡性T细胞会(Treg)数量正常，但白血病病患不存在一些系统弱点，其里面包括对IL-2的催化并能减再加。此外，白血病病患里面的现象CD4+T细胞会不太可能对平衡更加具抵抗性，显出为现象T细胞会的抑止消散，自然归因于的Treg和体外归因于的可借Treg，以及复合物经历的CD4+T细胞会里面IL-2催化消散。本研究者的借此是阐述了CD4+平衡性T细胞会(Treg)在海岸边亦非缓太快困难重重者里面的特征，他们的平均岁数为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

方法：BOX研究者是一项以人群进一步将的纵向研究者，在21岁所列确诊的病患亲族里面核查1型式白血病的危险因素。我们之前阐述了长期缓太快困难重重者的特征，他们保持多重肾脏自身血清乙型肝炎多达10年，但没有显现白血病的外科病因，太快性或非变性自身免疫。随后，10名之前保持无白血病并愿意提供大量血液取样的缓太快困难重重者纳入T和B细胞会系统比对。在现今的研究者里面，8名太快困难重重者(SP两组)，里面位岁数43岁(31-72岁)，18 - 32岁之间的肾脏自身血清乙型肝炎。所有的旁观者都位处1型式白血病困难重重的1期，尽管一些人随后失去了肾脏自身血清对某些复合物的乙型肝炎催化，然而，一名病患已经位处2期至再加6年，但没有显现外科病因，一名病患被诊断为白血病，该病患72岁，在挖掘核查和取样时，其HbA1c急剧下降到53 mmol/mol(7%)，在的测试里面对该丝氨酸展开了单独审计。分离外周血单个核细胞会(PBMCs)，改用多参数流式细胞会术和T细胞会抑止试验审计丝氨酸里面Treg的基频、表现型式和系统。应用于FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、表征和复归)展开无统筹聚类比对，审计Treg表现型式。

结果：与身体健康丝氨酸相比较，来自太快困难重重体的心灵CD4+T细胞会的统筹聚类结果显示，激活着的心灵CD4+ Treg基频增大，与糖皮质激素可借的TNFR关的蛋白(GITR)传达增大有关。一名HbA1c急剧下降的病患与困难重重缓太快者和变换的对照两组相比较，Treg曲谱有所不同。系统比对说明了，与身体健康丝氨酸相比较，来自缓太快困难重重体的Treg介导的CD4+现象T细胞会抑止明显受到破坏。显出为对现象CD4+T细胞会CD25和CD134传达的抑止增大。

示意图1 集中的表现型式比对结果显示，CD4+Treg亚型式在太快困难重重阐述符里面增大。由FlowSOM转化成的Treg过道，聚集在来自所有丝氨酸的活着CD4+CD45RA -细胞会上。根据标上物传达鉴定出10个元簇:心灵T细胞会_1;心灵T cell_2;心灵T cell_3;心灵T cell_4;CD49b心灵T细胞会;HLA-DR + GITR +心灵T细胞会;磁盘Treg_1;磁盘Treg_2;磁盘Treg_3;和磁盘Treg_4。(a)应用于9个不同Treg标上转化成的10个元簇的MST。每个端口亦然一个战斗群(100个战斗群)，更加大的元战斗群(10个元战斗群)在端口两组周围剪裁。每个端口里面的甜品示意图说明单个标上的传达级别。(b)每个元聚类的热示意图，以结果显示总体标上传达。(c, d)为HD两组(c)和SP两组(d)转化成示意图，以及FlowSOM辨认的每个元簇的覆盖层。(e-l)相对来说核素为每个metacluster筒等分(核素> 0.05%)相符为HD和SP两组:磁盘Treg_2 (e),磁盘Treg_3 (f),磁盘Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +心灵T细胞会(h)、心灵T cell_1(i),心灵T cell_2 (j),心灵T cell_3 (k) n d CD49b心灵T细胞会(l)。浅蓝色白点亦然慈善机构SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon一对一符号秩核查和。此键适用于示意图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

示意图2 应用于CITRUS的预测模型式推测，Treg基频的增大是困难重重缓太快的标志。评定暂时性(a - f)和水果比对(g-k)比较SP旁观者和变换的HD旁观者在CD4+CD45RA−T细胞会上的差异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群体的亦然性示意图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR传达展开分离，模拟FlowSOM群体。(b) HD(黑点)和SP(黑斑)两组以及丝氨酸SP 606(浅蓝色)里面CD25+ cd127的基频概述示意图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+暂时性弟集的筒等分;(c) HLA-DRloGITR−(磁盘Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(磁盘Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(磁盘Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+磁盘T cell)。(g - i)果树簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3传达风速图例，箭头突出的簇被辨认为SP和HD阐述符之间的不同。(j)筒等分结果显示了在SP(黑斑)和HD(灰点)两组里面，CITRUS心灵Treg_3和Treg_4的相对来说核素(数目)。(k)概率分布结果显示每个簇的表现型式(粉红色)和Treg标上相对来说传达与或多或再加传达(粉红色);上列，磁盘Treg_3;示意图一行，磁盘Treg_4。或多或再加与所有其他簇里面标上的传达有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon一对一符号秩核查和

示意图3 与身体健康献血者相比较，困难重重缓太快者心灵treg的GITR增大。每个心灵CD4+T细胞会元簇(心灵T细胞会_1;心灵T cell_2;心灵T cell_3;CD49b +心灵T细胞会;HLA-DR + GITR +心灵T细胞会;磁盘Treg_2;磁盘Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)侦测每个传达标上的波动。(a,b)来自HD (a)和S (b)阐述符的传达热示意图(sp606不包括在内)。(c,d)心灵Treg_4元簇里面所有HD(红色)、所有SP(粉红色)和SP 606(浅蓝色)的FlowSOM GITR传达联接，结果显示概率分布(c)和概述示意图(d)。Wilcoxon一对一符号秩和核查和，p< 0.07(浅蓝色)所有丝氨酸包括，p< 0.05(粉红色)丝氨酸SP 606和变换的HD不包括在测试里面。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs里面GITR传达，从评定暂时性，从所有HD(红色)、所有SP(粉红色)和SP 606(浅蓝色)联接，结果显示概率分布(e)和概述示意图(f) *p< 0.05, Wilcoxon一对一符号秩核查和

示意图4 来自缓太快困难重重的CD4+ treg细胞会掌控现象CD4+T细胞会的并能减再加。SP两组用粉红色的新线和白点说明，HD两组用黑色的新线和白点说明，浅蓝色的新线/白点说明丝氨酸sp606。应用于CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞会展开分选。CD4+CD25−(应答者)被标上为CFSE, Treg按检视的数目起始。用抗CD3 /28微珠转化细胞会，培训3在此之后展开流式细胞会术侦测。(a-d)与CD4+应答者相对来说应的treg培训(骨髓)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD应答者培训。(a,b,f) CFSE可借(a,e)和CFSE抑止倍数(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的抑止倍数。应用于乙型肝炎对照(激活着的响应细胞会不含treg)计算抑止倍数。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差比对。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

示意图5 现象CD4+T细胞会对缓太快困难重重的T细胞会转化的抑止更加适合于。SP两组用粉红色的新线和白点说明，HD两组用黑色的新线和白点说明，浅蓝色的新线/白点说明丝氨酸sp606。应用于CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞会展开分选。CD4+CD25−(应答者)被cfsel标上，treg按检视的数目起始。用抗CD3 /28微珠转化细胞会，培训3在此之后展开流式细胞会术(CD25反染)和细胞会因弟比对。HD Treg与HD、SP或sp606应答者共同培训。(a,b) CFSE可借(a)和CFSE抑止前年(b)。(c,d) CD25抑止前年(c)和CD134抑止前年(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培训里面的传达。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差比对。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

结论：我们得出的结论是，来自缓太快困难重重弟的转化心灵CD4+Treg在GITR传达里面获得了扩展和丰富，凸显了进一步研究者Treg在1型式白血病安全性变异里面的异质性的必要性。

原文原文：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28